熒光顯微鏡是利用特定波長的激發(fā)光照射被檢物體產生熒光進行鏡檢的顯微光學觀測技術，是醫(yī)院科研、病理、檢驗等部門常用的醫(yī)用光學儀器之一。有些物質受紫外線照射后可發(fā)熒光，另有一些物質需要用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發(fā)熒光，可以觀察到普通顯微鏡看不到的細節(jié)，大多數實驗室都有配備高質量或者常規(guī)的顯微成像系統(tǒng)，但是調整熒光，校正難度較高，因此需要了解熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式。

按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種。

UV激發(fā)是用短于400nm紫外光進行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光，容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。

BV激發(fā)是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發(fā)。適合使用藍光照射標本，用藍光作為激發(fā)光，熒光色素的吸收效率較高，可得到較明亮的圖像。

BV激發(fā)時要注意以下2點：

①熒光顯微鏡的截止濾光片要使用可*阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片；

②500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上會使整個圖像顯黃色。

因此，熒光顯微鏡的照明可根據聚光器的構造和激發(fā)光的波長按以下三點考慮。

①從熒光像的反差要求來看，UV激發(fā)暗場聚光器照明。
②以像的亮度來考慮，BV激發(fā)濾光片暗場觀察效率很高。

③UV激發(fā)濾光片暗場觀察和BV激發(fā)暗場聚光器照明的特性，可看作介于這兩種照明方法之間，但前者濾光片暗場的性質較強，顯示圖像較明亮，反差小；后者因保留暗場光路的性質，故顯示圖像較暗，而反差有所改善。當實際使用熒光顯微鏡時，應采用合適標本要求的照明法進行觀察。

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